血清的保存应该注意:热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀,此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活,除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物明显增多,而且还会影响血清的质量,补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌,如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。胎牛血清是品质高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分较为少。上海赛业血清哪里有
血清的主要质量标准:低内有毒的,无细菌、支原体、噬菌体、病毒等污染。无外源添加因子,不含、等。经过上百种细胞株和近百种原代细胞的验证,细胞状态良好。很好的、负责的血清品牌,都会做多细胞培养鉴定,观察细胞生长状态,做多项、多批次横向对比,才能较为终验证。使用便捷性:对于包装规格来说,常见的血清有500ml、100ml和50ml装的。各有优势。500ml适合一次性大量使用的,订购和储存更方便。100ml适合每次中等规模细胞培养使用的。50ml分装的就更适合每次小量细胞培养,也是现在比较流行的包装方式。上海赛业血清哪里有胎牛血清支持细胞增殖(Sp2/0-Ag14) 生长曲线(接种浓度)大增殖浓度≥2.5×106 个/ml。
血清的主要作用:对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被较广用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢医治中起重要作用,如SeO3,硒等。
热灭活:一般是以56℃,30分钟来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和。有必要做热灭活吗?实验显示,经过正确处理的热灭清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会明显的增多,这些沉淀物在倒立显微镜下观察,像是 "小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。购买的时候注意询问厂家是否是已灭清。血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。
对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。主要是:血清的成份可能有几百种之多,对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、无机物等。上海赛业血清哪里有
解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。上海赛业血清哪里有
为何血清会存在批间差?如何避免此影响?因为血清来源于动物,其组成成分有1000种左右,每个批号的组分和组分含量都是不固定的,因此批间差异是可能存在的。为了避免批间差异对细胞的影响,XP建议先进行批号测试,筛选合适的批号,备好库存(血清未开封时,在-20℃下可保存5年)。如需更换血清批次或产地,建议先试用后再大量订购。血清中沉淀是什么成分?造成原因有哪些?如何预防和处理沉淀?血清中沉淀主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘连蛋白,磷酸钙[1](显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。原因:造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活,反复冻融,长期储存于2-8℃或者室温。预防措施与建议:因此不立即使用的血清应保存在-20℃或以下。上海赛业血清哪里有