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潮州ELISA试剂盒使用方法

来源: 发布时间:2022年06月20日

ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一整天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大。ELISA试剂盒测定的抗原通常为各种纯化抗原。潮州ELISA试剂盒使用方法

Elisa试剂盒浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排装置加样。 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。潮州ELISA试剂盒使用方法ELISA试剂盒与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

双抗体(原)夹心法,通常是结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。加入酶标记的抗原或抗体,通过反应也结合在固相载体上。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据呈色的深浅进行定性或定量分析。酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA试剂盒根据要检测样品的数量来确定的板条数。每个比对的样品和空白孔是做复孔,而样品的数量就可以自己视情况而定,不过能用复孔的仍是用复孔。将标本液体1:1稀释后倒入50微升的反应孔中。在反应孔中在参加50微升的待测样品,然后马上参加50微升的生物素标记抗体,盖上模板,轻轻摇晃使其混合均匀后,ELISA试剂盒在37摄氏度的恒温下等候1小时。将孔内液体甩去,加满洗刷液,震动约30秒后,在甩去洗刷的液体,用纸将水吸干。这姿态重复三次。再在没空参加80微升的亲和链酶素-HRP,同上混合均匀后,在37摄氏度的恒温环境下等候半小时。珠式ELISA试剂盒的反应往往灵敏。

ELISA试剂盒进行各项实验条件的选择包括:固相载体的选择:不管何种载体,在使用前均可进行筛选,用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间,吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时,酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份),然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。ELISA试剂盒在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性。潮州ELISA试剂盒使用方法

ELISA试剂盒将样品或标准品加入孔中并孵育。潮州ELISA试剂盒使用方法

ELISA测定模式包括以下几种:双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法,其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的不公平竞争等因素的影响,结果重复性较差,质量较难控制。不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量完全致,即使是通过批批检的项目其检测结果也存在差异,因此必须选择和订购长批号的试剂,并保证保存条件。严格执行这标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程,并且能够保证结果的稳定性;对于效期短、使用率低的试剂,应当小量分装,每次使用则取分装部分即可,避免反复冻融造成试剂的失效。潮州ELISA试剂盒使用方法

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