ELISA试剂盒不论何种载体,在运用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,ELISA试剂盒时刻及其蛋白量也有一定影响,一般多选用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一起,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优越的诊断试剂离不开优越的原料。福建ELISA试剂盒哪家专业
ELISA试剂盒用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株重要氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与初次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物。福建ELISA试剂盒哪家专业用不同测定方法和不同测定条件下得到的测定值可能存在很大差异。
ELISA试剂盒在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。
由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一种既敏感又特异的方法。抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性。ELISA试剂盒固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
使用ELISA试剂盒的技术影响有多重要,不论做什么都是熟能生巧,ELISA实验自然也是如此,其中的操作技术是需要充分的文字了解与反复实践的。加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。ELISA试剂盒切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。福建ELISA试剂盒哪家专业
ELISA试剂盒方便试验操作者准确地做稀释工作。福建ELISA试剂盒哪家专业
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素。福建ELISA试剂盒哪家专业
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