单细胞测序结果动辄上百G数据量,庞大的数据对于分析平台和分析能力有着很高的要求,首先针对下机数据的质控环节:单细胞测序产生数亿的结果序列,不可避免的会出现低质量的测序结果,存在各种情况的序列污染。因此序列过滤及质量评估就会变得极为重要。序列质量主要通过测序质量值Q20/Q30的占比来表征,即碱基测序结果的错误率在1% / 0.1%以下的比例。理想的测序结果reads的碱基质量均高于30。保证数据获得后的处理结果的准确性,为后续细胞类型鉴定和功能分析打下坚实基础。从样本处理到终端数据分析,只要您需要,烈冰提供全流程的无忧服务。天津BD单细胞平台
现有的单细胞测序技术阵营在几个主要领域存在差别。一个是基于微流控通道的细胞与Beads的在通道内的动态结合,通过油相水相不相容的特点将结合了的细胞和Beads进行分隔,在这个空间,单个细胞的内容物释放,转录本或其他生物分析物被标记或添加索引,以便下游识别。BD Rhapsody单细胞测序平台采用静态微孔技术(Cyto-Seq具有类似的技术原理)。通过微孔板的物理分隔,将一个个单个细胞和带有标签的磁珠,一对一的“框”在微反应的物理平台中。这样,每一个细胞都会结合一个磁珠,那么在每一个磁珠中上长满了不同的Cell Barcode和UMI Barcode连接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,这个抓手就会使用oligo dT抓住mRNA构建文库。NovelBio单细胞测序烈冰测序服务已助力300余篇国际期刊研究文章发表。
烈冰生物BD Rhapsody平台,采用精简的工作流程助力您的实验成功: 1.制备单细胞悬液:可使用碧迪医疗单细胞多样本分析试剂盒和 /或BD Ab-seq寡核苷酸偶联抗体( Ab-Oligos)将细胞染色 2.微孔板预充和处理:使用自动移液器进行液体交换 3.单细胞捕获工作流程: (1)细胞上样:上样 575微升细胞悬液;系统未采用微流体通道设计,无需担心通道堵寨;通过重力轻轻沉淀细胞,可捕获脆弱细胞,BD Rhapsody微孔板包含大于220,000个分区,可在低双细胞率下捕获多达40000个细胞 (2)细胞上样扫描:估算捕获的活细胞数量和细胞多态率 (3)磁珠上样:微孔的正六边形几何形状和尺寸可防止磁珠多重分配在微孔中 (4)磁珠上样和磁珠洗涤扫描:估算包含活细胞和磁珠的微孔数量;测定细胞存留率,评估是否发生细胞损失 (5)细胞裂解:使用裂解缓冲液,确保细胞完全裂解 (6)磁珠回收:轻松、高效地磁性回收磁珠并采用Scanner扫描磁珠回收情况
作为单细胞测序的又一个重要里程碑,BD Rhapsody单细胞捕获平台整合了仪器、试剂盒和基础信息学软件,能精确对接illumina测序仪,因此可实现大量大细胞的快速高效标记、测序和分析,获得单细胞水平的基因表达谱和差异情况,并通过对复杂细胞群体进行深入细致分析,绘制大规模单细胞表达图谱。 以量化细胞内的群体异质性,并逐个鉴定细胞类型、细胞状态和动态细胞跃迁。除了有望鉴定新的细胞亚型和稀有细胞群体,单细胞技术还能更好地了解转录动态和基因调控关系。BD平台基于cyto-seq技术,实现细胞和磁珠的一对一结合。
烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据,深度解读数据分析结果,深入挖掘其背后的生物学意义;从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究,加速科研进程!此外,烈冰生信团队根据丰富的实战经验为用户量身打造了一款单细胞测序结果解读的神兵利器——单细胞浏览器(Single Cell Browser),不但可以将海量复杂的结果文件可视化,还是可以实现三维立体化展示的软件。专业的生信代码交给专业的烈冰,专业的生物学意义交给专业的您,详情请咨询烈冰生物。高通量测序技术是对传统测序一次突破性的改变,一次对几十万到几百万条核酸序列进行测定。上海BD Rhapsody单细胞测序服务公司
BD Rhapsody平台在细胞捕获过程中没有偏好性,可同样无差别捕获中性粒细胞。天津BD单细胞平台
对于单细胞测序而言,常常需要先构建细胞图谱,在此基础上再开展后续各项分析,并且数据分析时以细胞聚类(cell cluster)为讨论对象,而不是像常规Bulk测序一样以组别为分析对象,因此单细胞测序项目对样本入组要求没有Bulk测序那样严格,但是单细胞测序,特别是目的为图谱研究时,需要通过提高样本复杂度(增加样本数),尽可能的构建某一疾病类型、群体细胞图谱信息。因此,单细胞测序实验设计时首先需要保证生物学重复,不同样本来源的样本建议单独进行细胞解离和捕获、建库、测序,以保证捕获到足够的细胞数,单个样本分别捕获细胞时,后续分析除了整体分析以外,还可以做单样本分析,保证分析的完备准确性。天津BD单细胞平台
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